Implementación de un míºltiplex PCR para el diagnóstico del vibrio cholera, en el control de calidad de camarón de exportación - Aspiazu-Miranda, Elvia P.; Granda-Barba, Yazmin De Las Mercedes; Mosquera-Herrera, Carmen E. (Dominio de las Ciencias, 2017)
El objetivo del presente trabajo, es implementar la técnica de Multiplex- PCR para el diagnóstico en forma simultónea de los genes de toxina de Vibrio cholera, aislados a partir de muestras de Litopenaeus vannamei, evaluar este diagnóstico en situaciones de control epidemiológico y de control de calidad. Se usaron muestras de bacterias en medio de cultivo sólido y en caldos pre-enriquecidos para evaluar eficiencia mediante comparaciones de protocolos de miniprep de purificación fenol/cloroformo/isoamil alcohol, y método rópido para evitar usar fenol/cloroformo/isoamil alcohol; se emplearon iniciadores específicos de genes marcadores de virulencia, y se optimizaron las condiciones de amplificación de la Simple y Multiplex -PCR para la detección de Vibrio cholera. Se logró optimizar un multiplex PCR para la detección de Vibrio cholera empleando iniciadores para 4 genes de virulencia (ctxA, toxR, tcpA e hlyA) la cual después de optimización es capaz de detectar ctxA e hlyA en las diluciones 10-7 mientras que para los genes toxR y tcpA hasta la dilución 10-8, la cual basada en su sensibilidad se puede sugerir su uso como sistema de monitoreo sensible de productos acuícolas para determinar la inocuidad frente a este patógeno.